脒基酶

取自 食品百科全书

脒基酶

构建人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体，诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白。方法从大肠癌组织中提取总RNA，采用RTPCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段，经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx4SSAT。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中，经IPTG诱导表达，SDSPAGE电泳和Westernblot鉴定表达蛋白，并通过6Histag，利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序显示，人SSAT的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx4中，而且方向正确，SDSPAGE电泳显示表达出20?kD的外源蛋白。Westernblot检测结果显示，表达出的蛋白为6Histag的融合蛋白，而且用NiNTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论成功构建、表达和纯化了重组SSAT蛋白，为制备其抗体及研究该基因与结直肠肿瘤的关系提供了有力的工具。