电泳缓冲液

取自 食品百科全书

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电泳缓冲液

测序凝胶加样缓冲液

98%去离子甲酰胺

10mol/L EDTA(pH8.0)

0.025%二甲苯青FF

0.025%溴酚蓝

甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺,其纯度符合使用要求,无须再进行处理。不过,一旦略呈黄色,则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理,并用Whatman 1号滤纸过滤2次,去离子甲酰胺分装成小份,充氮存于-70℃。

常用的电泳缓冲液

  缓冲液      	          使用液	                               浓贮存液(每升)
Tris-乙酸(TAE)	          1×:0.04mol/L Tris-乙酸	             50×:242g Tris碱
 	                   0.001mol/L EDTA	                   57.1ml冰乙酸
 	 	                                                 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)


Tris-磷酸(TPE)	         1×:0.09mol/L Tris-磷酸	             10×:10g Tris碱
 	                  0.002mol/L EDTA	                    15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
 	 	                                                  40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)


Tris-硼酸(TBE)a	0.5×0.045mol/L Tris-硼酸	      5×:54g Tris碱


 	                  0.001mol/L EDTA	                     27.5硼酸
 	 	                                                   20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)


碱性缓冲液b	       1×:50mmol/L NaOH	                    1×:5ml 10mol/L NaOH
 	                 1mmol/L EDTA	                    2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)


Tris-甘氨酸c	      1×:25mmol/L Tris                     5×:15.1g Tris
 	                250mmol/L 甘氨酸	                       94g 苷氨酸(电泳级)(pH8.3)
 	                0.1% SDS	                            50ml 10% SDS(电泳级)

说明:

①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液,出现沉淀后则予以废弃。

以片都以1×TBE作为使用液(即1:5稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1:10稀释的贮存液作为使用液。

进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小, 故通过缓冲液的电流量通常较大,需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。

②碱性电泳缓冲液应现用现配。

③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2×SDS凝胶加样缓冲液:

100mmol/L Tris·HCl(6.8)

200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)

4%SDS(电泳级)

0.2%溴酚蓝

20%甘油

不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温,应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。

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